癌基因TBC1D3的功能研究

发布时间：2017-08-06 05:09

  本文关键词：癌基因TBC1D3的功能研究

  更多相关文章： TBC1D3 Hippo信号通路 RhoA GEF-H1

【摘要】：TBC1D3是一类在灵长类动物中特有的并在人类基因组中出现重复的癌基因,在部分前列腺癌和乳腺癌中都发现了它的扩增。扩增是癌基因常见的激活方式,表现为包括双微体和均质染色区在内的染色体异常所导致的基因拷贝数目的增加。TBC1D3发生扩增的原因及其致癌机制尚未清楚。Hippo信号通路是近年来发现的一条在生理情况下控制器官大小的信号通路,它的异常调控会导致肿瘤的发生。在哺乳动物中,经典的Hippo信号通路由激酶Mstl/2,激酶Lats1/2以及它们的效应蛋白YAP/TAZ构成。我的研究发现TBC1D3是一个全新的Hippo信号通路调控基因,实验表明,它的过表达可以显著激活Hippo通路下游的辅转录因子YAP和TAZ。为了更好地阐明TBC1D3对Hippo信号通路的调控作用,我构建了四环素诱导]HBC1D3C表达的稳定细胞系,利用该细胞系进行的一系列研究发现,TBC1D3C可以与小G蛋白RhoA的鸟苷酸交换因子GEF-H1直接相互作用,使其脱离细胞微管骨架而活化,之后进入细胞质激活RhoA。活化的RhoA促使微丝发生聚合,对Lats1/2激酶进行抑制,最终导致YAP和TAZ的去磷酸化激活。总结来看,本研究发现了灵长类动物特有的基因TBC1D3通过抑制Hippo通路来促进肿瘤发生的可能机制；提出了一个新的GEF-H1激活途径；此外,更深入地阐明了Hippo信号通路从微管解聚到YAP/TAZ激活的中间过程,深化了我们对细胞骨架调控Hippo通路的理解。
【关键词】：TBC1D3 Hippo信号通路 RhoA GEF-H1
【学位授予单位】：浙江大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R730.2
【目录】：

• 致谢5-6
• 摘要6-7
• Abstract7-8
• 缩略词表8-12
• 1 引言12-16
• 1.1 基因扩增与癌症发生12
• 1.2 TBClD3蛋白的基本介绍12-14
• 1.3 Hippo信号通路的发现及发展14-15
• 1.4 GEF-H1与Rho家族介绍15-16
• 2 材料和方法16-26
• 2.1 胞系16
• 2.2 实验方法16-19
• 2.2.1 主要溶液及配方16-18
• 2.2.2 主要试剂和抗体18-19
• 2.2.3 载体及菌株19
• 2.3 试验方法19-26
• 2.3.1 细胞总RNA的制备19-20
• 2.3.2 逆转录合成cDNA20
• 2.3.3 实时定量PCR20-22
• 2.3.4 胞转染22-23
• 2.3.5 Western blot免疫印迹检测23
• 2.3.6 双荧光报告实验23
• 2.3.7 蛋白纯化23-24
• 2.3.8 免疫沉淀24
• 2.3.9 免疫荧光24-25
• 2.3.10 RBD pull down25
• 2.3.11 全细胞裂解液活化的鸟苷酸交换因子分析25-26
• 3 实验结果26-58
• 3.1 TBC1D3诱导YAP/TAZ的去磷酸化及入核26-33
• 3.2 TBC1D3激活YAP/TAZ的关键位点及关键区域的鉴定33-38
• 3.3 TBC1D3依赖于RHOA来调控Hippo信号通路38-45
• 3.4 TBC1D3与GEF-H1直接相互作用并介导其从微管解离激活45-58
• 4 讨论58-61
• 5 小结61-62
• 参考文献62-68
• 作者简历68

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本文编号：628467