红树莓花色苷制备及其抗衰老、抗肺癌细胞A549增殖活性的研究

发布时间：2020-11-20 01:43

　　红树莓(Rubus idaeus L.)为蔷薇科悬钩子属植物,含有多种具有抗炎、抗氧化、抑菌等活性成分。随着花色苷功能性研究的不断深入,针对红树莓花色苷成分鉴定以及更加深入功能性研究有着重要意义。因此本论文以红树莓为原料提取花色苷,通过制备和结构鉴定,然后利用衰老模型小鼠和肺癌细胞A549进行深入功能性研究,为红树莓花色苷未来在食品和医药等领域应用提供一定数据参考。主要研究结果如下:1.利用超声辅助酶法来提取红树莓花色苷,经过单因素实验和响应面优化设计得出花色苷最佳提取工艺:果胶酶浓度为5 mg/g、料液比为1:15(g/mL)、酶解pH为3.0、酶解温度为50℃、超声时间为20 min、超声功率为450 W、酶解时间60 min,在此条件下花色苷含量为127.51 mg/100 g,较超声法提高46.38%,较酶法提高23.88%,因此说明联合提取法与单一法相比提取更充分。2.通过大孔树脂吸附和解吸附能力的比较,从AB-8、D101和D406中筛选出AB-8;采用花色苷浓度为40μg/mL、pH为3.0、速度为2 mL/min上样并采用90%的乙醇进行洗脱,经AB-8纯化的红树莓花色苷色价为61.3±0.22、纯度为27.3±0.48%;红树莓花色苷种类经UPLC-Q/TOF-MS鉴定出4种花色苷,分别为:芍药素-3-葡萄糖苷、矢车菊素-3-葡萄糖苷、矢车菊素-3-阿拉伯糖苷和矢车菊素-3-芸香糖苷。3.通过对衰老模型小鼠进行红树莓花色苷干预,通过小鼠的器官指数计算、器官和血清抗氧化酶活力检测及心脏和肾脏病理学观察,初步对红树莓花色苷的抗衰老作用进行评估。结果表明:红树莓花色苷对衰老造成的胸腺和脾脏指数的下降有一定的改善作用,使衰老小鼠器官和血清中SOD、CAT、GSH-Px活性显著提高、降低MDA含量,同时也显著提高皮肤组织中HYP含量,对改善内脏和皮肤衰老状况起到积极的作用;病理学切片显示经过红树莓花色苷干预后心肌细胞和肾脏细胞结构清晰、数量增加、逐渐恢复接近于正常状态,说明红树莓花色苷对于自由基造成氧化损伤起到缓解作用、对衰老起到抑制作用。4.通过MTT法、细胞形态学观察和流式细胞仪检测细胞凋亡三方面进行红树莓花色苷对肺癌细胞A549作用的评价。结果显示:MTT法显示100μg/mL红树莓花色苷作用A549细胞48 h细胞抑制率达到80.39%。倒置显微镜显示100μg/mL花色苷作用下的A549细胞附着能力下降、细胞变圆或者不规则。细胞凋亡情况显示100μg/mL花色苷处理组细胞凋亡率为40.53%,说明红树莓花色苷具有抑制肺癌细胞A549增殖的作用。
【学位单位】：锦州医科大学
【学位级别】：硕士
【学位年份】：2019
【中图分类】：TS264.4;TS201.4
【部分图文】：

对花,酶浓度,果胶酶,软件处理

进行 3 次平行试验。验设计及数据处理采用 Design Expert8.0.5 软件处理数据， Excel2007 软件处理。验结果浓度对花色苷含量的作用影响可以看出，果胶酶浓度在 2~6 mg/g 范围内，花色苷的含量上升的趋势。这是因为果胶酶浓度的增加有利于果胶的分增加；当果胶酶浓度大于 5 mg/g 时，酶质量浓度达到饱和不显著（p>0.05），说明酶解反应已经基本完成，因此本实围在 4~6 mg/g。

对花,提取液,花色苷,提取量

图 2-2 料液比对花色苷含量的作用Fig.2-2 Effect of material/liquid ratio on the extraction of anthocyaninpH 对花色苷含量的作用影响3 可以看出，随着 pH 的增高，提取液中花色苷含量呈现升，花色苷提取量不再继续增加。这说明，在 pH3.0 左右达酶酶解效果增强，使得提取液中花色苷充分暴露，提取液色苷可以较稳定存在于酸性环境中。因此，本实验选择。

对花,酶解,提取液,花色苷

图 2-2 料液比对花色苷含量的作用Fig.2-2 Effect of material/liquid ratio on the extraction of anthocyaninpH 对花色苷含量的作用影响可以看出，随着 pH 的增高，提取液中花色苷含量呈现升，花色苷提取量不再继续增加。这说明，在 pH3.0 左右达酶酶解效果增强，使得提取液中花色苷充分暴露，提取液色苷可以较稳定存在于酸性环境中。因此，本实验选择。
【参考文献】

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