慈姑多糖的制备、结构表征及其生物活性研究

发布时间：2024-04-11 03:36

　　慈姑(Sagittaria sagittifoliaL.)为泽泻科(Alismataceae)慈姑属多年生水生草本植物,其地下球茎为可食部位,亦称茨菇。多糖是慈姑的主要活性成分之一,但关于慈姑多糖的研究甚少,严重阻碍了慈姑多糖资源的开发和应用。基于此,本文利用超声辅助提取慈姑粗多糖后,经分级醇沉、柱层析分离获得慈姑均一多糖,并对其化学结构、链构象及其生物活性进行研究。通过本论文的研究可为慈姑多糖超声-醇沉高效制备技术的研究奠定理论基础和依据,开发高活性慈姑多糖健康产品以提高国民健康水平,具有重要的理论价值和现实意义。主要研究内容和结果如下:(1)慈姑多糖的超声辅助提取工艺优化在考察提取温度、超声时间、超声功率和液料比四个因素的基础上,利用响应面试验优化出慈姑多糖的最佳提取参数为:超声功率120W、提取温度85℃;提取时间15 min;液料比43 mL/g,该条件下慈姑多糖提取得率为34.78%,与常规热水提取法相比,其提取得率提高了约168%。结果表明,超声辅助提取能显著提高慈姑多糖的提取效率,是适宜慈姑多糖提取的有效方法。(2)慈姑多糖的分级醇沉和活性的筛选将慈姑多糖粗提物进行初步分...

【文章页数】：90 页

【学位级别】：硕士

【文章目录】：
摘要
abstract
第一章 绪论
    1.1 慈姑简介
        1.1.1 慈姑的外观及产地
        1.1.2 慈姑的营养成分
        1.1.3 慈姑的药理作用
    1.2 慈姑多糖的研究进展
    1.3 植物多糖的研究概况
        1.3.1 植物多糖提取方法
        1.3.2 植物多糖分离和纯化
        1.3.3 植物多糖纯度和分子量测量
        1.3.4 植物多糖的结构鉴定
        1.3.5 植物多糖的生物活性研究
    1.4 本论文的研究意义和主要内容
        1.4.1 本课题的研究意义
        1.4.2 主要研究内容
    1.5 技术路线
第二章 慈姑多糖的超声辅助提取工艺优化
    引言
    2.1 实验材料
        2.1.1 实验材料和试剂
        2.1.2 主要仪器和设备
    2.2 实验方法
        2.2.1 慈姑原料的预处理及基本含量测定
        2.2.2 多糖含量的测定
        2.2.3 超声辅助提取慈姑多糖的单因素实验设计
        2.2.4 超声辅助提取慈姑多糖的响应面分析实验
        2.2.5 传统热水提取慈姑多糖
    2.3 结果与分析
        2.3.1 慈姑原料基本含量及葡萄糖标准曲线
        2.3.2 单因素实验结果分析
        2.3.3 模型分析
        2.3.4 响应面分析
        2.3.5 预测模型的验证和最佳条件的确定
        2.3.6 与传统热水提取方法的比较
    2.4 本章小结
第三章 慈姑多糖的分级醇沉和活性筛选
    引言
    3.1 实验材料
        3.1.1 实验材料和试剂
        3.1.2 主要仪器和设备
    3.2 实验方法
        3.2.1 慈姑多糖的分级醇沉
        3.2.2 SPUs的化学含量和得率测定
        3.2.3 单糖组成测定
        3.2.4 分子量测定
        3.2.5 紫外光谱测定
        3.2.6 红外光谱测定
        3.2.7 DPPH·清除率的测定
        3.2.8 ABTS⁺·清除率的测定
        3.2.9 ·OH清除率的测定
        3.2.10 细胞的复苏、传代和冻存
        3.2.11 巨噬细胞增殖活性实验
    3.3 结果与分析
        3.3.1 各化学成分的标准曲线
        3.3.2 SPUs的化学成分含量
        3.3.3 SPUs的单糖组成
        3.3.4 SPUs的分子量
        3.3.5 SPUs的特征骨架和官能团
        3.3.6 SPUs对DPPH·的清除能力
        3.3.7 SPUs对ABTS⁺·的清除能力
        3.3.8 SPUs对·OH的清除能力
        3.3.9 SPUs促进巨噬细胞增殖活性分析
        3.3.10 SPUs的结构与抗氧化活性的相关性分析
    3.4 本章小结
第四章 均一组分SPU70的制备及其结构表征
    引言
    4.1 实验材料
        4.1.1 实验材料和试剂
        4.1.2 主要仪器和设备
    4.2 实验方法
        4.2.1 DEAE-52柱层析分离纯化
        4.2.2 Sephadex G-50柱层析纯化
        4.2.3 SPU70-W1多糖含量和得率的测定
        4.2.4 SPU70-W1的纯度鉴定和相对分子量测定
        4.2.5 SPU70-W1的单糖组成
        4.2.6 部分酸水解
        4.2.7 高碘酸氧化
        4.2.8 Smith降解
        4.2.9 紫外光谱扫描
        4.2.10 红外光谱测定
        4.2.11 刚果红测定
        4.2.12 扫描电镜观测
        4.2.13 原子力显微镜观测
        4.2.14 核磁共振分析
    4.3 结果与分析
        4.3.1 DEAE-52柱层析分离
        4.3.2 Sephadex G-50凝胶柱层析纯化
        4.3.3 多糖均一性及分子量
        4.3.4 单糖组成
        4.3.5 主链和支链组成
        4.3.6 高碘酸氧化确定糖苷键类型
        4.3.7 Smith降解进一步确定糖苷键的类型
        4.3.8 多糖骨架及构型
        4.3.9 多糖链构象
        4.3.10 表面形貌
        4.3.11 形态和尺寸及力学特性
        4.3.12 糖单元的连接模式
    4.4 本章小结
第五章 SPU70-W1的免疫调节和抗肿瘤活性的初步研究
    引言
    5.1 实验材料
        5.1.1 实验材料和试剂
        5.1.2 主要仪器和设备
    5.2 实验方法
        5.2.1 细胞的复苏、传代和冻存
        5.2.2 巨噬细胞细胞毒性实验
        5.2.3 巨噬细胞吞噬中性红能力实验
        5.2.4 巨噬细胞释放NO的测定
        5.2.5 Western-blot法检测蛋白的表达
        5.2.6 SPU70-W1对肝癌细胞的体外抑制作用
    5.3 结果与分析
        5.3.1 SPU70-W1对巨噬细胞增殖活性的影响
        5.3.2 SPU70-W1对巨噬细胞吞噬中性红能力的影响
        5.3.3 SPU70-W1对巨噬细胞释放NO的影响
        5.3.4 SPU70-W1对巨噬细胞分泌炎症因子的影响
        5.3.5 SPU70-W1对肝癌细胞的抗增殖作用
    5.4 本章小结
第六章 结论与展望
    6.1 结论
    6.2 创新点
    6.3 展望
参考文献
致谢
在学期间发表的学术论文



本文编号：3950815