肿瘤坏死因子α表位结合肽与模拟肽的研究

发布时间：2024-07-01 21:29

　　肿瘤坏死因子α(tumor necrosis factor α，TNFα)具有对某些恶性肿瘤的抑制或杀伤作用，也是致内毒素性休克、急性移植物抗宿主病及一些自身免疫病的重要效应因子，因此TNFα的改造和TNFα拮抗剂的研究受到各国学者的重视。重组TNFα及其拮抗剂(包括抗TNFα单抗、抗TNFα受体单抗、可溶性TNFα受体、TNFα突变体)均已应用于临床并取得了一定的治疗效果。但单抗的人源化、重组细胞因子或受体的纯化、不同程度的抗原性及价格因素等均成为上述制剂在国内应用的制约因素。近年来的研究发现，小分子细胞因子模拟物具有细胞因子受体激动剂或拮抗剂的作用，且小分子模拟物因容易合成并能够给予高浓度、可口服等优点使其具有更加广阔的研发与应用前景。筛选TNFα小分子模拟肽及结合肽对于TNFα研究具有重要的意义。本研究包括以下四个方面： 1、TNFα结合肽的研究：以rhTNFα为靶对噬菌体环七肽库进行筛选，以寻求可拮抗TNFα活性的小分子短肽。三轮筛选后，随机挑选23个噬菌体克隆经ELISA鉴定，其中11个克隆显示可与TNFα有较强的结合，DNA测序结果推导氨基酸序列，其中两个克隆的氨基...

【文章页数】：92 页

【学位级别】：硕士

【部分图文】：

图1一1噬菌体克隆与rhTNFa的结合

物加入到rhTNFa包被的酶标孔内，固相表面的rhTNFa与液相中的th飞NFa竞争与噬菌体克隆结合，以此来鉴定所筛选的噬菌体克隆是否位点准确即是否确实和TNFa结合(见图1一2):

图2一1噬菌体克隆与包被TNFamAb的结合

试验结果显示阳性克隆均与TNFamAb具有较强的结合活性(见图2一2):

图2一2TNFamAb与噬菌体克隆的结合

断阳性噬菌体克隆LCS一7与TNFamAb之间的结合，借此测定阳性噬菌体克隆是否模拟rFNFa的表位与相应的受体结合。设定低表达r1NFa受体的CHO细胞为阴性对照。计算抑制率(见图2一3):

图3一1正常包被组噬菌体克隆与TNFa的结合

No.ofPhageelonesNol一20:Phageelone，No21:unrelatedPhageelone，No22:12一merPePtidelibrary图3一2甲醛固定组噬菌体克隆与TNFa结合试验Fig.3一2BindingofrhTNFawith12merPh....

本文编号：3999210