5-氮杂胞嘧啶核苷通过逆转hepaCAM基因启动子甲基化抑制膀胱癌细胞增殖

发布时间：2024-06-14 02:22

　　第一部分hepaCAM基因腺病毒载体构建和鉴定 目的：构建表达hepaCAM基因的重组腺病毒并在膀胱癌BIU-87细胞中鉴定。 方法：以pEGFP-N2-hepaCAM质粒载体为模板，PCR扩增hepaCAM基因；将hepaCAM基因克隆到穿梭质粒pAdtrack-CMV，构建穿梭载体pAdtrack-CMV-hepaCAM；经PmeI线性化后，在含pAdEasy-1的大肠杆菌BJ5183中进行同源重组，筛选阳性克隆；线性化后在HEK-293细胞中包装、扩增，利用报告基因EGFP进行病毒滴度检测；实时荧光定量PCR，Western blot鉴定感染腺病毒的膀胱癌BIU-87细胞中hepaCAM基因的表达。 结果：测序、酶切验证重组腺病毒载体pAdEasyI-hepaCAM构建成功；病毒滴度可达1.6×1012；荧光定量PCR、 Western blot均显示感染hepaCAM腺病毒后膀胱癌BIU-87细胞中hepaCAM基因表达增高。 结论：成功构建hepaCAM腺病毒载体。 第二部分5-氮杂胞嘧啶核苷通过逆转hepaCAM基因启动子甲基化抑制膀胱癌细胞增殖 目的：探究去甲基化药物5-...

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【部分图文】：

图1.1hepaCAM基因PCR扩增产物凝胶电泳图

e)化学发光在暗室条件下，将发光液A、B液按所需量1:1吸干残留液体，用移液器将混匀的发光液均匀地覆盖于PV仪器中成像。7统计分析所有数据都用SPSS16.0统计学软件分析，结果都以（x析方法对不同组间数据进行比较，结果以p<0.05表示统计具果Hep....

图1.2重组穿梭质粒的PCR验证Fig.1.2IdentificationofrecombinantshuttleplasmidwithPCRM:DNAmarkerDL2000;1,2,3,4,5,6:hepaCAM基因PCR扩增产物

图1.2重组穿梭质粒的PCR验证Fig.1.2IdentificationofrecombinantshuttleplasmidwithPCRM:DNAmarkerDL2000;1,2,3,4,5,6:hepaCAM基因PCR扩增产图1.3....

图1.3重组穿梭质粒的PCR验证Fig.1.3Identificationofrecombinantshuttleplasmidwithrestrictiveenzymedigestion

图1.3重组穿梭质粒的PCR验证Fig.1.3IdentificationofrecombinantshuttleplasmidwithrestrictiveenzymedigestionM:DNAmarkerDL2000;1,2:kpnI和....

图1.4重组穿梭质粒测序结果

图1.2重组穿梭质粒的PCR验证Fig.1.2IdentificationofrecombinantshuttleplasmidwithPCRM:DNAmarkerDL2000;1,2,3,4,5,6:hepaCAM基因PCR扩增产物图1.....

本文编号：3994000