ABCA1、SR-BI/CLA-1表达上调剂脂代谢调节作用及机制研究
发布时间：2024-05-29 01:33
目的：发现新型调血脂药物的先导化合物,进一步探讨该化合物体外对脂代谢的调节作用及机制。方法：本实验应用中国医学科学院医药生物技术研究所国家新药(微生物)筛选实验室前期工作中建立的人ABCA1和CLA-1表达上调剂筛选模型筛选获得能上调ABCA1和CLA-1表达的化合物；利用实时荧光定量PCR法和蛋白质印迹法研究化合物对目的基因及蛋白的作用；应用核受体PPAR激活实验及PPARa/γ拮抗剂实验考察化合物对目的基因调节的机制；利用巨噬细胞泡沫化的定性及定量实验、荧光标记的胆固醇外排实验、前脂肪细胞的诱导分化实验等考察化合物的体外调节脂代谢的作用。结果：对中国医学科学院医药生物技术研究所国家新药(微生物)筛选实验室化合物库中的20000个化合物应用人ABCA1和CLA-1表达上调剂筛选模型进行筛选,发现化合物E23869上调ABCA1的活性为196%,E23869上调CLA-1的活性为198%；RT-PCR和Western blot实验结果表明,在小鼠单核巨噬细胞RAW264.7和人正常肝细胞L02中,E23869均能在mRNA及蛋白表达水平上显著上调ABCA1、SR-BI/CLA-1及AB...
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
缩略语
中文摘要
ABSTRACT
前言
第一章 文献综述
1.1 调血脂药物的研究现状
1.2 ABCA1概述
1.2.1 ABCA1的结构
1.2.2 ABCA1基因的表达与调控
1.2.3 ABCA1的功能
1.3 SR-BI概述
1.3.1 SR-BI的结构
1.3.2 SR-BI基因的分布及调控
1.3.3 SR-BI的功能
1.4 ABCG1概述
1.4.1 ABCG1的结构及分布
1.4.2 ABCG1的功能
第二章 ABCA1和CLA-1表达上调剂的的高通量筛选
2.1 实验材料
2.1.1 细胞株
2.1.2 细胞培养基
2.1.3 主要试剂
2.1.4 耗材
2.1.5 主要仪器
2.1.6 主要软件
2.2 实验方法
2.2.1 细胞的培养
2.2.2 ABCA1和CLA-1表达上调剂的筛选
2.2.3 ABCA1和CLA-1表达上调剂的量效关系测定
2.3 实验结果
2.3.1 应用ABCA1和CLA-1表达上调剂筛选模型的筛选结果
2.3.2 化合物E23869在ABCA1和CLA-1表达上调剂筛选模型中的量效关系曲线
第三章 化合物E23869的体外活性测定
3.1 实验材料
3.1.1 细胞株
3.1.2 细胞培养基
3.1.3 主要试剂
3.1.4 抗体
3.1.5 Real-time荧光定量引物
3.1.6 主要仪器
3.1.7 主要软件
3.2 实验方法
3.2.1 细胞的培养
3.2.2 MTT实验
3.2.3 蛋白质免疫印迹法检测化合物对目的基因蛋白表达水平的影响
3.2.4 逆转录聚合酶链反应检测化合物对目的基因mRNA表达水平的影响
3.2.5 化合物对巨噬细胞泡沫化及细胞内总胆固醇的影响
3.2.6 化合物对胆固醇外排实验的影响
3.3 实验结果
3.3.1 化合物E23869的细胞毒性试验
3.3.2 化合物E23869对小鼠单核巨噬细胞株Raw264.7目的基因蛋白水平的影响
3.3.3 化合物E23869对小鼠单核巨噬细胞株Raw264.7目的基因mRNA水平的影响
3.3.4 化合物E23869对人正常肝细胞株L02目的基因蛋白水平的影响
3.3.5 化合物E23869对人正常肝细胞株L02目的基因mRNA水平的影响
3.3.6 化合物E23869对巨噬细胞泡沫化的影响
3.3.7 化合物E23869对巨噬细胞内的胆固醇流出的影响
第四章 活性化合物E23869的机制研究
4.1 实验材料
4.1.1 细胞株
4.1.2 菌株
4.1.3 质粒
4.1.4 培养基
4.1.5 主要试剂
4.1.6 主要软件
4.2 实验方法
4.2.1 细胞的培养
4.2.2 活性化合物对核受体的激动活性作用
4.2.3 蛋白质免疫印迹法检测活性化合物对目的基因蛋白表达水平的机制研究
4.2.4 活性化合物对小鼠前脂肪细胞株3T3-L1的诱导分化实验
4.3 实验结果
4.3.1 活性化合物E23869对PPARα/PPARγ体外转录激活的作用
4.3.2 活性化合物E23869对目的基因蛋白表达水平的机制研究
4.3.3 活性化合物E23869对前脂肪细胞诱导分化的影响
第五章 综合结论
5.1 实验讨论
5.1.1 靶向RCT的新型药物的筛选
5.1.2 E23869的体外分子药理学研究
5.1.3 E23869的机制研究
5.1.4 展望
5.2 综合结论
参考文献
攻读硕士学位期间发表的论文
致谢
个人简历
本文编号：3983888
【文章页数】：69 页
【学位级别】：硕士
【文章目录】：
缩略语
中文摘要
ABSTRACT
前言
第一章 文献综述
1.1 调血脂药物的研究现状
1.2 ABCA1概述
1.2.1 ABCA1的结构
1.2.2 ABCA1基因的表达与调控
1.2.3 ABCA1的功能
1.3 SR-BI概述
1.3.1 SR-BI的结构
1.3.2 SR-BI基因的分布及调控
1.3.3 SR-BI的功能
1.4 ABCG1概述
1.4.1 ABCG1的结构及分布
1.4.2 ABCG1的功能
第二章 ABCA1和CLA-1表达上调剂的的高通量筛选
2.1 实验材料
2.1.1 细胞株
2.1.2 细胞培养基
2.1.3 主要试剂
2.1.4 耗材
2.1.5 主要仪器
2.1.6 主要软件
2.2 实验方法
2.2.1 细胞的培养
2.2.2 ABCA1和CLA-1表达上调剂的筛选
2.2.3 ABCA1和CLA-1表达上调剂的量效关系测定
2.3 实验结果
2.3.1 应用ABCA1和CLA-1表达上调剂筛选模型的筛选结果
2.3.2 化合物E23869在ABCA1和CLA-1表达上调剂筛选模型中的量效关系曲线
第三章 化合物E23869的体外活性测定
3.1 实验材料
3.1.1 细胞株
3.1.2 细胞培养基
3.1.3 主要试剂
3.1.4 抗体
3.1.5 Real-time荧光定量引物
3.1.6 主要仪器
3.1.7 主要软件
3.2 实验方法
3.2.1 细胞的培养
3.2.2 MTT实验
3.2.3 蛋白质免疫印迹法检测化合物对目的基因蛋白表达水平的影响
3.2.4 逆转录聚合酶链反应检测化合物对目的基因mRNA表达水平的影响
3.2.5 化合物对巨噬细胞泡沫化及细胞内总胆固醇的影响
3.2.6 化合物对胆固醇外排实验的影响
3.3 实验结果
3.3.1 化合物E23869的细胞毒性试验
3.3.2 化合物E23869对小鼠单核巨噬细胞株Raw264.7目的基因蛋白水平的影响
3.3.3 化合物E23869对小鼠单核巨噬细胞株Raw264.7目的基因mRNA水平的影响
3.3.4 化合物E23869对人正常肝细胞株L02目的基因蛋白水平的影响
3.3.5 化合物E23869对人正常肝细胞株L02目的基因mRNA水平的影响
3.3.6 化合物E23869对巨噬细胞泡沫化的影响
3.3.7 化合物E23869对巨噬细胞内的胆固醇流出的影响
第四章 活性化合物E23869的机制研究
4.1 实验材料
4.1.1 细胞株
4.1.2 菌株
4.1.3 质粒
4.1.4 培养基
4.1.5 主要试剂
4.1.6 主要软件
4.2 实验方法
4.2.1 细胞的培养
4.2.2 活性化合物对核受体的激动活性作用
4.2.3 蛋白质免疫印迹法检测活性化合物对目的基因蛋白表达水平的机制研究
4.2.4 活性化合物对小鼠前脂肪细胞株3T3-L1的诱导分化实验
4.3 实验结果
4.3.1 活性化合物E23869对PPARα/PPARγ体外转录激活的作用
4.3.2 活性化合物E23869对目的基因蛋白表达水平的机制研究
4.3.3 活性化合物E23869对前脂肪细胞诱导分化的影响
第五章 综合结论
5.1 实验讨论
5.1.1 靶向RCT的新型药物的筛选
5.1.2 E23869的体外分子药理学研究
5.1.3 E23869的机制研究
5.1.4 展望
5.2 综合结论
参考文献
攻读硕士学位期间发表的论文
致谢
个人简历
本文编号：3983888
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